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細胞凋亡事件發(fā)生時，會出現(xiàn)蛋白質(zhì)和核酸分子結(jié)構(gòu)的改變，形成新的表位。利用免疫學方法對這些表位進行鑒定，有助于判斷樣本中細胞凋亡事件的發(fā)生。
細胞凋亡的發(fā)生，是由于內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶的激活，這種鈣和鎂依賴性核酸酶容易進入的核小體間區(qū)解開雙鏈DNA，產(chǎn)生單/低聚核小體片段，而核小體本身由于DNA與組蛋白H1、H2A、H2B、H3和H4形成緊密復合物而不被核酸內(nèi)切酶裂解。采用雙抗體夾心酶免疫法，應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體，與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu)，可特異性檢測細胞溶解物中的單/低聚核小體，從而判斷細胞是否發(fā)生凋亡。
【材料與試劑】
（1） 生物素標記的小鼠抗-組蛋白單克隆抗體；
（2） 過氧化物酶（-POD）標記的小鼠抗DNA單克隆抗體；
（3） 鏈霉親合素包被的微孔板；
（4） DNA-組蛋白復合物，作為陽性對照；
（5） ABTS底物；
（6） 溶解緩沖液；
（7） 溫育緩沖液；
底物緩沖液；
培養(yǎng)細胞或離體細胞的裂解物（細胞裂解步驟：收集細胞，離心后，用200μl溶細胞緩沖液重新懸浮，室溫下作用30min）；
培養(yǎng)細胞的上清液；
血漿（血清）；
分光光度計
【操作步驟】
（1） 取樣品離心后（1000r/min， 10min），吸取20μl上清液，加入鏈霉親合素包被的培養(yǎng)板孔中；
（2） 另加入80μl免疫反應(yīng)試劑：含抗-DNA-POD、抗組蛋白-生物素及溫育緩沖液（按1:1:18混合），室溫下孵育2h（置搖床上，250r/min）；
（3） 棄上清，用300μl溫育緩沖液洗滌3次，小心移去洗滌液；
（4） 加入100μl底物緩沖液，室溫下孵育至顏色變化至適合（置平板搖床上）；
【結(jié)果判斷】
盡快作比色分析（10～20min內(nèi)），用底物緩沖液作空白對照，檢測波長405nm，參考波長492nm。

聚集值 = 樣品的mU（誘導凋亡處理的細胞） × 100
對照的mU（未經(jīng)誘導凋亡處理的細胞）

注：mU=吸收值（10-3）=雙孔吸收值的平均OD值-底物OD值，若樣品的吸收值超過比色測定范圍，應(yīng)適當稀釋后再檢測。